質(zhì)譜法測蛋白相對分子質(zhì)量

蛋白質(zhì)分子量是蛋白質(zhì)的一個重要特征參數(shù)。質(zhì)譜法可以用于蛋白質(zhì)分子量的測量鑒定，質(zhì)譜結(jié)合液相色譜可以用于蛋白混合物分子量的測定。百泰派克生物科技提供基于質(zhì)譜的蛋白質(zhì)分子量測定服務(wù)。

質(zhì)譜法測相對分子質(zhì)量

質(zhì)譜法測蛋白相對分子質(zhì)量是利用質(zhì)譜技術(shù)對蛋白質(zhì)的分子量進(jìn)行測定。目前，廣泛使用于蛋白質(zhì)分子量分析的質(zhì)譜主要有兩種類型：一種是MALDI-TOF，結(jié)合了MALDI離子化技術(shù)和TOF質(zhì)譜技術(shù)，可以直接對分子量進(jìn)行測定；另一種是ESI-MS，結(jié)合了電噴霧電離ESI和質(zhì)譜技術(shù)，使用高分辨率質(zhì)譜分析電噴霧得到多電荷信號，然后對信號進(jìn)行去卷積分析，獲得j_ī_n_g|q_u_è的分子量數(shù)值。這兩種方法各有其優(yōu)點(diǎn)及適用的領(lǐng)域。MALDI離子化效率非常高，可以對極微量的樣品進(jìn)行分析。ESI可以產(chǎn)生多電荷峰，可以獲得準(zhǔn)確的離子分子質(zhì)量。更詳細(xì)的比較見下圖。

高分辨質(zhì)譜測分子量

單抗質(zhì)譜分子量檢測

單抗即單克隆抗體，是指由單克隆細(xì)胞產(chǎn)生的抗體。抗體屬于蛋白質(zhì)，單抗質(zhì)譜分子量檢測是用質(zhì)譜技術(shù)檢測單抗蛋白質(zhì)的分子量。因此，同其他蛋白質(zhì)一樣，單抗分子量可以用MALDI-TOF和ESI-MS等質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行檢測?；|(zhì)輔助激光解吸電離（MALDI）與電噴霧電離（ESI）都是在質(zhì)譜中使用的軟電離技術(shù)，與ESI相比MALDI產(chǎn)生的多電荷離子更少，不需要額外的去卷積步驟即可對蛋白樣品進(jìn)行分析。然而，對于分子量較大的蛋白質(zhì)，平均質(zhì)量與準(zhǔn)確質(zhì)量差別很大，所以大于25kDa分子量的蛋白質(zhì)類物質(zhì)分子量鑒定推薦高分辨率質(zhì)譜ESI-MS鑒定策略。而單克隆抗體主要由兩條輕鏈和兩條重鏈組成，分子量一般約在150kDa左右，因此單抗分子量檢測一般采用ESI-MS。

混合物的分子量測量

混合物的范圍較為寬泛，這里主要介紹蛋白質(zhì)混合物的分子量測量。蛋白質(zhì)混合物包括蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)與非蛋白質(zhì)的混合物。因?yàn)橘|(zhì)譜檢測對樣品的純度要求較高，特別是在只用一級質(zhì)譜的時候，所以用質(zhì)譜法對蛋白質(zhì)混合物的分子量進(jìn)行測量時需要先通過分離技術(shù)把混合物分離成為簡單的較純的組分后，再對每一組分中物質(zhì)的分子量進(jìn)行測定，在蛋白質(zhì)分子量測定中，常用的分離技術(shù)為高效液相色譜（HPLC）?；旌衔飿悠肥紫葧?jīng)過高效液相色譜分離，分離后的不同組分再進(jìn)入質(zhì)譜進(jìn)行分子量測定。利用液相色譜結(jié)合串聯(lián)質(zhì)譜（MS/MS）可以更高效靈敏地檢測混合物蛋白質(zhì)的分子量。

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