檢測技術(shù)服務(wù):液質(zhì)聯(lián)用檢測磷酸化位點

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過去確定磷酸化位點zuì常用的是逐步化學(xué)降解法，如絲氨酸和蘇氨酸磷酸化分析方法、酪氨酸磷酸化分析方法。隨著生命科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，化學(xué)方法已經(jīng)被質(zhì)譜法所取代，目前可通過液質(zhì)聯(lián)用（LC-MS）檢測磷酸化位點。

液質(zhì)聯(lián)用一般是由前端液相色譜+質(zhì)譜儀組成，液相色譜為分離系統(tǒng)，質(zhì)譜為檢測系統(tǒng)，樣品在質(zhì)譜部分和流動相分離，被離子化后，經(jīng)質(zhì)譜的質(zhì)量分析器將離子碎片按質(zhì)量數(shù)分開，經(jīng)檢測器得到質(zhì)譜圖。復(fù)雜的蛋白混合物中大規(guī)模的磷酸化蛋白分析包括磷酸化蛋白/磷酸化肽段的鑒定，以及磷酸化殘基的測序和磷酸化位點鑒定，均可通過液質(zhì)聯(lián)用方法檢測。

液質(zhì)聯(lián)用檢測分析是鑒定特異性磷酸化蛋白/多肽以及對特異性磷酸化殘基進行定位的有用工具，其具有高靈敏度和高分辨率，可以識別單個蛋白質(zhì)或者多肽。盡管磷酸化多肽的信號通常比非磷酸化多肽的信號弱，但是zuì新的技術(shù)已經(jīng)可以使質(zhì)譜信號富集，包括固定化金屬親和層析、磷酸特異性抗體富集、化學(xué)修飾方法和用生物素部份置換磷酸基團。

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