檢測技術服務:Edman降解的設計方法

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Edman降解（Edman degradation）是鑒定蛋白質一級結構的化學方法，是測定蛋白質、多肽或者氨基酸殘基序列的一種技術。

通過預先完善Edman降解的設計方法可在一定程度上提升蛋白測序試驗的成功率，是蛋白質測序過程中一個非常重要的步驟。Edman降解的具體設計方法主要分為以下幾個部分。

蛋白質裂解過程：由于Edman降解法不能對超過60個氨基酸的肽段進行測序分析，對于長肽段的測序，需要將長肽段裂解為氨基酸個數在Edman降解的測序范圍內的短肽段。裂解過程可使用內肽酶（如胰蛋白酶或胃蛋白酶）或者化學試劑（如溴化氰）進行。之后依次對短肽段進行測序，通過片段間的重疊拼接整體蛋白質的序列信息。

Edman反應過程：可將待測序的蛋白質吸附到固體表面上，常見的一種固體基材是涂有聚丁二烯（一種陽離子聚合物）的玻璃纖維。將Edman試劑苯基異硫氰酸酯（PITC）與弱堿性緩沖溶液（pH=8.0-9.0，如12%三jiǎ胺）一起添加到吸附的蛋白質中，與氨基酸N端的α游離氨基進行反應，形成末端殘基的苯硫代氨基甲酰基（PTC）衍生物，即PTC-肽。

加酸裂解：即添加無水酸（如三氟乙酸）來選擇性的分離N末端氨基酸，此時PTC衍生物發生異構化生成替代物苯基硫代乙內酰脲，通過洗脫替代物并進行色譜鑒定即可對得到的氨基酸殘基進行檢測。

蛋白質鑒定：重復以上化學反應循環，將每個循環中從蛋白質或肽段N末端釋放出的氨基酸經過層析或高效液相色譜法（HPLC）檢測，即可識別并鑒定所得氨基酸。

百泰派克生物科技采用島津公司Edman測序系統，為廣大科研工作者和科研客戶提供基于Edman降解的蛋白質N端測序服務。采用我們的測序系統，可以測定N端30個氨基酸的序列信息。采用特定的蛋白上樣系統，可以測定N端的60-70個氨基酸。百泰派克生物科技也建立了以先jìn的LC-MS/MS技術進行N-端測序的平臺，可以測出封閉和修飾的蛋白質末端，與基于Edman降解的蛋白質N端測序形成互補，保證N端測序服務的順利進行。

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